Durante este semestre estaremos 1) transformando clones de GFP pETBlue-1 en células que expresan la polimerasa T7 para identificar los fenotipos mutantes.  Ya que la técnica del semestre pasado fue para confirmar si las células tenían insertos y luego de seleccionar estas células, se extrae el plasmidio y se ponen estas nuevas células que nos permiten ver el fenotipo.  2) Secuenciaremos los clones de GFP mutagénicos y normales.  Esto se hará para identificar los lugares en el genoma que cambiaron y los lugares conservados para la expresión del genotipo.  3) Analizaremos las proteínas mutagénicas de GFP mediante cristalografía para estudiar más a fondo la estructura y cómo fue afectada al compararla con la estructura original de la proteína.  4)  Insertar los genes normales y mutagénicos de GFP en Halobacterium utilizando el pNG168 “Shuttle Vector”.  Estas son nuestras metas y propósitos de todo el proyecto y esperamos poder completarlo a lo largo de este semestre.

El trabajo de este semestre es uno de continuación.  Esta sería la parte final de la investigación de encontrar una variante de GFP con propiedades nuevas y útiles para estudiar la expresión genética en organismos como las archeas, que son bacterias que viven en ambientes extremos.

Las nuevas técnicas que planificamos utilizar son la de cristalografia, la cual se utiliza para estudiar la estructura tridimensional de las proteínas, y además poder estudiar las propiedades físicas de la misma.  También, utilizar un “shuttle vector” para transformar a Halobacterium. El “shuttle vector” es un vector que puede ser insertado en dos organismos.   Esta técnica se usa para expresar un gen en E. coli y luego pasarlo a organismos más complicados como es el caso de Halobacterium.